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(TaqMan荧光定量PCR试剂盒)

  • 更新时间:  2019-12-03
  • 产品型号:  2X 探针法qPCR Mix
  • 简单描述
  • 2X 探针法qPCR Mix (TaqMan荧光定量PCR试剂盒)是基于荧光探针检测的即用型 PCR 试剂盒,可以对靶片段进行实时定量 PCR 分析(quantitative PCR、qPCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量 PCR 所需要的成分
详细介绍

产品及特点 2X 探针法qPCR Mix (TaqMan荧光定量PCR试剂盒) 是基于荧光探针检测的即用型 PCR 试剂盒,可以对靶片段进行实时定量 PCR 分

析(quantitative PCR、qPCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动 Taq DNA 聚合

酶、Taq DNA 稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量 PCR 所需要的成分,用户

只需加入基因组 DNA 或 cDNA 模板、引物和探针即可进行探针法实时定量 PCR 反应,具有

广泛的用途。2X 探针法qPCR Mix (TaqMan荧光定量PCR试剂盒) 具有下列特点:

1. 以 2×Mix 提供,用户只需准备模板、引物、探针和 ROX 染料(取决于 qPCR 仪器)

即可以进行探针法实时定量 PCR 实验,非常方便快捷,降低了操作误差。

2. 各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。灵敏度可以

达到 50 拷贝/反应(跟模板质量,引物设计等相关)。

3. 既可用于 TaqMan 探针 qPCR,也可以是分子信标(molecular beacon)探针 qPCR。

4. 灵敏度和专一性比染料法荧光定量 PCR 更高。

5. 可用于基因表达分析、SNP 分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。

6. 本产品只能用于科研,1mL 足够 100 次 20uL 体系的探针法 qPCR 反应。

规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装 十孔盒包装

2×探针法 qPCR Mix 190303 1 mL(棕色盖) 1 mL(棕色

盖)×10

使用手册 190303sc 1 份 1 份

2X 探针法qPCR Mix (TaqMan荧光定量PCR试剂盒)

运输及保存 低温运输,-20℃保存, 不冻融时保存期限为 24 个月。如果需要每天使用,可在 4℃放置三

周。

自备试剂 DNA 模板、引物、超纯水。

使用方法

1. 如果有 N 个样品并且做定量分析,设置 N+7 个反应,多出的 7 个中,6 个是做标

准曲线的阳性对照,一个是阴性对照(NC)。在 N+7 个 PCR 管中,加入下列成分。如

果是做定性分析,则 6 个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照(PC),用户自己需要

根据下表进行适当修改(把 6 个标曲反应改成 1 个阳性对照反应)。

成分 N 个样品管

6 个标准

曲线管

NC 管

2×探针法 qPCR MagicMix 各 10 uL 各 10 uL 10 uL

自备引物 1(10uM) 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自备引物 2(10uM) 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自备模板 DNA

基因组 DNA 10-100ng 不加 不加

或 cDNA 1-10ng 不加 不加

自备阳性对照模板(6 各梯度) 不加 各 1 uL(各

加 1 个梯度) 不加

阴性对照模板(一般用水) 不加 不加 1 uL

自备探针(0.5uM) 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自备 50×自备 ROX I 或 ROX II

染料(见注)

各 0.4 uL 各 0.4 uL 0.4 uL

补超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL

注,下列信息仅供参考,具体以 qPCR 仪器的使用手册为准。

1、不需要 ROX 的机型:Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、,、

Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型号的荧光 PCR 仪

器不需要加 ROX 染料,但加入的话也不会影响整个 PCR 分析。

2、需要使用 ROX I 的机型:ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、

Step One Plus。

3、需要使用 ROX II 的机型:ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、

Corbett RotorGene 3000。

2. 放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考,一定需要根据靶分子长度,引

物和探针的 Tm 值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法 PCR:

步骤 反应参数 备注

预变性 94℃ 2 分钟

PCR(35-45 次循环)

94℃ 15 秒

靶分子 长 度在

80-200bp

55-65℃ 15-30 秒

在此步采集荧光信号,通

道根据标记染料决定

72℃ 30 秒

如果引物 Tm 值接近 60℃,也可以选择两步法 PCR:

步骤 反应参数 备注

预变性 94℃ 2 分钟

PCR(35-45 次循环)

94℃ 15 秒

靶分子 长 度在

80-200bp

60℃ 60 秒

在此步采集荧光信号,通

道根据标记染料决定

3. 数据处理

如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘

制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推

算出其浓度。

如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性。一般情况下,阴性对照 Ct 大于或

等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。

对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果

在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小

于 40,则为阳性。

关联产品 染料法 qPCR MagicMix


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