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禽流感病毒通用型RT-PCR检测试剂盒

  • 更新时间:  2018-11-13
  • 产品型号:  A0001P
  • 简单描述
  • 禽流感病毒通用型RT-PCR检测试剂盒,欢迎新老客户咨询订购,可来电索取该产品规格报价和说明书,也可以咨询我公司在线客服。
详细介绍

产品名称;禽流感病毒通用型RT-PCR检测试剂盒

产品规格:50次

产品用途:检测应激基因遗传特性,用于种猪筛选,种群优化

检测样本:血液

       我公司科产品获得广大师生好评,如:RNA纯化,DNA纯化,核酸电泳回收,探针标记与检测,核酸扩增,克隆表达等产品,蛋白质细胞生物与基因研究产品,质粒载体、微生物菌种、培养基、PCR检测试剂盒产品。

欢迎新老客户咨询订购,可来电索取该产品规格报价和说明书,也可以咨询我公司在线客服。

产品部分说明如下,由于篇幅限制,如需更加详细说明书请联系--。

禽流感病毒通用型RT-PCR检测试剂盒需要自备的物品

1.仪器:分析天平、水浴锅、离心机、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL)。

2.耗材:眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL一次性注射器、1.5 mL灭菌离心管、琼脂糖、500 mL量筒、500 mL锥形瓶、吸头(10 μL、200 μL、1000 μL)、灭菌双蒸水。

注意事项

1.所有接触病料的物品均应合理处置,以免污染实验室。

2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。

3.所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化,8000 rpm离心15 s,使液体全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取,使用后立即放回-20 ℃。

4.消化液低温时可能出现结晶,请于37 ℃温育,溶解至澄清透明后使用。

5. 染色液低毒,操作时应戴上手套,避光保存,较长时间不使用请存放于4℃,以免挥发变干。染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。

6.注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。

7.严格遵守操作说明可以获得好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。

8.反复冻融试剂将减低检测灵敏度,建议在3次内用完,请严格按试剂盒说明书操作。

样品制备

1 样品采集:病死或扑杀的动物,取肺、淋巴结等组织;待检活动物,用注射器取血5 mL。2~8 ℃保存,送实验室检测。(要求送检病料新鲜,严禁反复冻融病料。)

2 样品处理:每份样品分别处理。

2.1 组织样品处理:每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g,用手术剪剪碎混匀后取0.05 g于研磨器中研磨,加入1.5 mL生理盐水继续研磨,待匀浆后转至1.5 mL灭菌离心管中,8000 rpm离心2 min,取上清液100 μL于1.5 mL灭菌离心管中,再加入200 μL消化液和20 μL蛋白酶K,振荡混匀后,置56 ℃水浴中消化1小时。

2.2 全血样品处理:待血凝后取血清100 μL,加入200 μL消化液和20 μL蛋白酶K,振荡混匀后,置56 ℃水浴中消化1小时。

2.3 阳性对照处理:取阳性对照100 μL,加入200 μL消化液和20 μL蛋白酶K,振荡混匀后,置56 ℃水浴中消化1小时。

2.4 阴性对照处理:取阴性对照100 μL,加入200 μL消化液和20 μL蛋白酶K,振荡混匀后,置56 ℃水浴中消化1小时。

操作步骤

1 病毒DNA的提取

1.1 从水浴锅中取出样品管,降至室温后,加入300 μL DNA结合液,颠倒混匀,将全部液体移入吸附柱中(吸附柱要套上收集管,吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质,以免离心时堵塞吸附柱),室温静置3 min,10000 rpm离心30 s。

1.2 弃去收集管中液体,加入500 μL DNA洗涤液,10000 rpm离心30 s。

1.3 重复步骤1.2。

1.4 弃去收集管中液体,10000 rpm空柱离心1 min,以除去残留的DNA洗涤液。

1.5将吸附柱放入新的1.5 mL离心管中,向柱中央加入DNA洗脱液(56 ℃预热)50 μL,室温放置2 min,10000 rpm离心30 s,离心管中液体即为模板DNA。

2 PCR扩增

每份总体积20 μL,含16 μL PCR反应液(用前混匀),2 μL Taq DNA聚合酶,2 μL模板DNA。

例如:n份样品,配制n+1份,16×(n+1)PCR反应液,再加入2×(n+1)Taq DNA聚合酶,混匀后取18 μL分装成n份,分别加入2 μL模板DNA,加入20 μL矿物油覆盖(有热盖的PCR扩增仪不用加),作好标记。

在PCR扩增仪上进行以下程序:94 ℃ 3 min;循环94 ℃ 30 s,62 ℃ 45 s,72 ℃ 45 s,共35次;再72 ℃延伸10 min。

3电泳

称2 g琼脂糖放于500 mL锥形瓶中,加入50倍稀释的TAE电泳缓冲液200 mL(取4 mL 50倍TAE电泳缓冲液,用双蒸水稀释至200 mL),于微波炉中熔解,再加入10 μL 染色液混匀。在电泳槽内放好梳子,倒入琼脂糖凝胶,待凝固后将PCR扩增产物10 μL混合2 μL上样缓冲液,点样于琼脂糖凝胶孔中,以110~120 V电压于50倍稀释的TAE电泳缓冲液中电泳,紫外灯下观察结果。

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