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GES-1人胃黏膜上皮细胞

  • 更新时间:  2020-09-22
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • GES-1人胃黏膜上皮细胞是T25直接发货的形式。收到细胞后,拆开包装T25瓶的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用,如细胞密度高于80%,可以直接消化传代,相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。
详细介绍

1、细胞名称:GES-1人胃黏膜上皮细胞

2、生长特性:    □ 贴壁   贴壁不牢容易脱落,消化无需胰酶请谨慎操作。)

3、细胞生长条件:

培养条件   

90%DMEM(高糖)+10%FBS+1%P/S

温度                   

             37℃

空气条件  

           5% CO2,100% AIR

传代方法

1:2传代,2~3天换液

冻存条件

90%FBS+10%DMSO

4.GES-1人胃黏膜上皮细胞背景资料:我们推荐使用AAV-293细胞株繁殖腺病毒相关重组病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293细胞株,但产生的病毒滴度更高。 HEK293细胞是剪切过的腺病毒5型DNA转染的人胚肾细胞。 跟HEK293细胞一样,AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因,当共转染三个AAV助质粒(一个含ITR的质粒,pAAV-RC, 和E1缺失助质粒)时,可以产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒。

二.使用方法

1、收到细胞后,请按照以下方法进行操作

取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

 

2、细胞传代:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)用5-6ml完全培养基轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min

3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬然后按1:2比例进行分瓶传代,放入37℃,5%CO2胞培养箱中培养;

4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代

3、细胞冻存:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min

3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;

4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏:GES-1人胃黏膜上皮细胞
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37水浴中解冻,直至冻存管中结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min

3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

T25瓶处理方法

收到后,检查外包装是否完整,细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题,请即时。并进行以下操作:

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理,以稳定细胞状态。

3. 预热培养基(含10%胎牛血清,1%双抗)。

4. 显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40×,100×,200×各一张)。

5. ①若细胞密度较小,无菌操作,去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上,进行传代。

②若细胞密度较大,达到80%以上,将细胞传代培养。

GES-1人胃黏膜上皮细胞注:

培养瓶里的培养基血清浓度为5%,建议更换成自己配好的新鲜培养基。由于运输过程中的问题,细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来,显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况,这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基。(这里是针对原来完全培养基FBS浓度是10%的情况,如果原来FBS浓度是20%,可以增加到25%FBS浓度)   收到细胞后如细胞状态不佳或培养中遇到问题,烦请当天尽快并提供图片,以便售后处理。7天内反馈,本身问题免费重发如人为原因导致可根据实际情况酌情处理;7天内未接到任何反馈视为合格,不予免费售后GES-1人胃黏膜上皮细胞


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