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人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa试剂盒

  • 更新时间:  2020-04-21
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • 人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中肝炎病毒抗体(MHV-Ab)相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色
详细介绍

实验原理:
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa试剂盒应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的转移酶水解酶(XTH)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入,再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中含量。

?本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的活性。
?有效期:6个月
?保存条件:2-8℃
?仅供科研使用,不得用于临床诊断
检测前准备工作:
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2.从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成500ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4℃
3.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
实验所需自备试验器材:
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa试剂盒组成:
备注:
1.(96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。
2.标准品浓度依次为:200、100、50、25、12.5、0 mU/mL

样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa试剂盒注意事项:
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品,不同批号组分不得混用。
10.如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
操作步骤:
1.标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
4.温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
7.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
8.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,    
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD      
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值                   
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释       (此图仅供参考) 
倍数,即为样品的实际浓度。                                 
试剂盒性能:
1.检测范围:6.25 mU/mL - 200 mU/mL
2.批内与批间应分别小于9%和11%灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 mU/mL   

人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa试剂盒性能:
1.检测范围:6.25 mU/mL - 200 mU/mL
2.批内与批间应分别小于9%和11%
灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 mU/mL  


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