您好,欢迎进入上海雅吉生物科技有限公司网站!
一键分享网站到:
产品搜索
PRODUCT SEARCH
产品分类
PRODUCT CLASSIFICATION
相关文章
RELEVANT ARTICLES
您现在的位置:首页 >> 产品中心 >> >> 即用型PCR检测试剂盒 >> AdamsH5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒

H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒

  • 更新时间:  2018-04-19
  • 产品型号:  Adams
  • 简单描述
  • H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒的AFLP(amplified fragment length polymorphism)原理是一种结合 RFLP 和 PCR 技 术特点的、迄今为止Z有效分子标记分型技术,其原理如下: 本产品在传统 AFLP-PCR 的基础上经过精心优化而开发,
详细介绍

H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒AFLP(amplified fragment length polymorphism)原理是一种结合 RFLP 和 PCR 技 术特点的、迄今为止zui有效分子标记分型技术,其原理如下: 本产品在传统 AFLP-PCR 的基础上经过精心优化而开发,
H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒具有下列特点:
1. 一站式,足够 50 次酶切-连接反应、50 次预扩反应和 1600 次 AFLP PCR(PCR 按 30 uL 体系计算),但不包括 DNA 纯化和带型分析试剂(如 PAGE 电泳试剂和 银染试剂)。
2. 本系列产品提供 EcoRI-MseI 组合,适用于 GC 含量在 50%以上的基因组。对 GC 含量在 50%以下的基因组,需从本公司采购 AFLP(EcoRI-TaqI)组合。
3. 各种参数都经过优化,一次 PCR 所得 AFLP 片段数一般在 10-100 之间,可重复 性好,误差小于 0.6%。4. 本产品适用于基因组在 500 Mb-6000 Mb 的材料(如动物和植物),对于基因组 在 50-500 Mb 的材料(如细菌和真菌)或 50Mb 以下的材料(如质粒,cosmid, BAC,YAC 和 PAC 等),需要分别另购专门的+1 型预扩引物混合液和+3 型 EcoRI 引物(8 种)AFLP 引物对。


运输及保存 低温运输、-20℃保存, 有效期一年。
自备试剂 Southern 级 DNA 纯化试剂,尿素-PAGE 电泳套装,银染试剂盒。
使用方法 一、 DNA 提取(本试剂盒不提供相关试剂)
用户需要自备 50-500ng Southern 级别的基因组 DNA,用前zui预实验以确保 DNA 能
够被 EcoRI 和 MseI 内切酶彻底切开。
二、 限制性酶切和接头连接反应(本试剂盒足够 50 次本反应)
1. 在 0.2 mL 离心管中加入设置 20 uL 的限制性内切酶酶切体系:
成分 用量
酶切-连接 Buffer,10× 2 uL
样品 DNA
50 ng(对小基因组材料)
500 ng(对大基因组材料)
如果用对照,则用 5uL
EcoR I-Mse I 酶混合液 2 uL
超纯水 加水到 20 uL
2. 轻柔混匀并短暂离心后,37℃保温 2 小时酶切(若 PCR 仪器不带热盖,则必须加 50uL自备石蜡油,否则水分会蒸发影响反应。下同),70℃保温 15 分钟灭活内切酶。
3. 在上述酶反应体系中加入 20 uL EcoRI-MseI 接头混合物和 1 uL T4 DNA 连接酶,轻柔混匀并短暂离心后,20℃保温 2 小时让接头跟 DNA 段相连。
4. 在一个离心管中加入 10 uL 上步得到的连接反应液和 90uL TE 缓冲液,pH8,充分混匀,得到酶切-连接反应 10 倍稀释液,未用完的酶切-连接反应原液(30uL)可放-20℃保存。
三、 预扩增(本试剂盒足够 50 次本反应)
5. 在 0.2 mL 离心管中设置 30 uL 的 PCR 体系:
6. 离心数秒,按下列参数进行 PCR 预扩增:
温度 时间
94℃ 30S
PCR(20 次) 56℃ 60S
72℃ 60S
7. 可以取 10 uL PCR 产物在 1.5%琼脂糖胶上电泳检测,产物为 100-1500 bp 模糊条带。
8. 将剩下的预扩反应液用 TE 稀释 50 倍,直接用于下步反应或放-20℃保存待用。
四、选择性 PCR 扩增(本试剂盒足够至少 1600 次本反应)
9. 在 0.2 mL PCR 管中,加入下列成分(如果用户已经知道哪个一种或几种引物组合适合自己的材料,则直接使用;如果不知道,则需要预先测试所有 64 种组合,设置 64 个 PCR反应),下面只是一种组合:
成分 体积
预扩反应液 50 倍稀释液
10. 轻柔混匀后离心数秒,按下列参数进行 PCR:
温度 时间
94℃ 30 秒
PCR(13 次) 65℃ 30 秒(每次循环递减 0.7℃)
72℃ 60 秒
94℃ 30 秒
PCR(23 次) 55℃ 30 秒
72℃ 60 秒
延伸 72℃ 5 分钟
五、尿素-PAGE 电泳和银染
关联产品


留言框

  • 产品:

  • 留言内容:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 详细地址:

  • 省份:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
    QQ在线客服
  •   在线咨询
  • 点击这里给我发消息
电话
021-346612765
手机
15821073967