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血涂片的隐脂类的苏丹黑B法类脂染色试剂盒

  • 更新时间:  2018-04-19
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • 血涂片的隐脂类的苏丹黑B法类脂染色试剂盒研究真核基因的Z基础的工作之一就是确定其转录终止位点,目前Z通用的方 法是 5′-RACE 法,RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是 Frohman 发明的、通过 PCR 快速克隆 cDNA 末端的技术
详细介绍

研究真核基因的zui基础的工作之一就是确定其转录终止位点,目前zui通用的方 法是 5′-RACE 法,RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是 Frohman 发明的、通过 PCR 快速克隆 cDNA 末端的技术,它在不建立 cDNA 文库的前提下, 利用已知 cDNA 序列设计引物,通过往两端延伸和扩增获得其 5′-端序列。本试剂盒 就是根据 5′-RACE 原理而开发,
血涂片的隐脂类的苏丹黑B法类脂染色试剂盒具有下列特点: 1. 即开即用,客户不需要单独准备各种材料。
2. 反应条件经过精心优化,包括使用无 RNase H 活性的 MMLV 和优化的引物。
血涂片的隐脂类的苏丹黑B法类脂染色试剂盒的原理如下图:

自备试剂:Poly(A) RNA(或总 RNA)、基因专一性引物 A、B、C、75%乙醇。
注意:自备的 基因专一性引物 A,B,C 的相对位置应该跟本手册产品介绍中的示意图*。 运输及保存 低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法
1. 变性模板 RNA:将 1 μg mRNA 或 5 μg 总 RNA 加入到一个 RNase-free 的 PCR 管中,补 RNase-Free 水到 9 μL,65℃保温 5 分钟后短暂离心,立即放 冰上待用。如果 RNA 浓度偏低,体积超过 9 μL,可以使用本公司的核酸浓缩剂 (需另购,产品编号为 110801-30)浓缩到所需的体积。
2. 设置 RT 反应(用户可以根据需要设阴性对照):在上步的含变性后的 RNA 模 板的 PCR 管中,按顺序加入:
3. 37℃保温 60 分钟, 42℃保温 30 分钟, 50℃保温 10 分钟,zui后 75℃保温 10 分钟使逆转录酶变性。短暂离心 5 秒后待用。
4. 在 PCR 管中加入 40 μL 微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂,用前 需要充分摇匀再取用),震荡混匀。
5. 室温12000 rpm离心15分钟,小心吸弃上清。此步沉淀可以去除多余的dNTP。
6. 加入 1mL 自备 75%乙醇,室温 12000 rpm 离心 5 分钟,小心吸弃上清。
7. 短暂离心数秒,小心吸弃残留液体后,稍微晾干后加入 20 μL RNase-free 水, 充分吹打溶解,得到 cDNA 溶液待用。注意:为保证加尾效率,溶解 cDNA 的 RNase-free 水zui不要超过 20 μL。
8. 在两个塑料离心管中按下表设置加尾反应(强烈建议做一组加尾阴性对照管)
9. 37℃保温 15 分钟进行加尾反应,然后 75℃保温 3 分钟灭活末端转移酶。 10. 分别加入 0.5 mL RNase-free 水稀释样品管和对照管中的加尾反应产物。此稀 释液将作为 PCR 的模板。 11. *轮 PCR:按下表分别使用不同体积的样品管稀释液和对照管稀释液做模板 设置 PCR 反应(单位:μL,下表只列出以样品管稀释液为模板的反应)。
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