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常见的原代细胞新手问题解答

浏览次数:69发布日期:2020-04-21
  原代细胞培养也叫初代培养,是建立细胞系的关键一步,其步骤包括取材→分离→培养和维持,为了让新手能更好地了解它,下面我们来解答一些常见的问题。
 
  1、原代细胞与细胞系有什么区别?
 
  根据传统定义,自组织一开始收获和接种的细胞被称为原代细胞,这类细胞直接从组织分离,生命周期有限,经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的较大生长空间,以保持细胞群中基因型和表型的一致性。
 
  细胞系是不断生长、分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。
 
  但实际上,经过长时间、连续的传代培养后,细胞系随着代数的增加,细胞的基因型和表型都有可能发生改变。
 
  需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群,除非细胞经过了遗传改造。
 
  2、倍增和代数有什么区别?
 
  倍增是培养物中细胞总数的翻倍,通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出,传代培养过程的次数,传代培养的目的,是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
 
  3、接收到的冻存细胞该如何处理?
 
  收到包装箱后,立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快,以避免升温。不要将细胞储存在-80℃,这样会对细胞造成不可挽回的伤害。
 
  4、冻存的细胞该如何开始培养?
 
  (1) 将一管细胞从液氮罐中取出,注意保护手和眼睛。
 
  (2) 将冻存管快速的放入37℃水浴中,轻轻握住并旋转,直到管内物体完全融化。
 
  (3) 将冻存管立即从水浴中拿出,擦干,转入无菌环境。
 
  (4) 用70%的酒精冲洗冻存管,然后擦去多余酒精。
 
  (5) 打开盖子,注意手指不要碰到里面的螺纹(注意,由于冻存管有负压,开盖时可能会有少量溢出,这是正常现象)。
 
  (6) 用多聚赖氨酸(或参照说明书)包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。
 
  (7) 盖好培养瓶的盖子,轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。
 
  (8) 将培养瓶放入培养箱中(37℃,5%CO2,95%空气)
 
  (9) 放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基,以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。
 
  5、细胞培养过程中,多久更换一次培养基?
 
  这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基,许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
 
  注意:冻存细胞复苏后,在6-16小时内更换培养基,以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。
 
  6、我能扩增培养和再次冻存原代正常人类细胞吗?
 
  这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞,神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞,不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等,可以扩增培养和再次冻存。
 
  然而,需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。
 
  7、培养瓶中应该加入多少体积的培养基?
 
  我们推荐的用量为:T-25培养瓶5ml,T-75培养瓶15ml,T-150培养瓶30ml。
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